摘要 :目的 觀察明暗箱實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠避暗潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)的影響 ,并初步探討其機(jī)制 。 方法 按分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)將小鼠分為 6 組 ( n = 10) :生理鹽水組 (NS 組) ,一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 組 (S 組) ,*** (5 mg· kg - 1 、10 mg·kg - 1 、20 mg· kg - 1) 組 ( K 5 、K 10 、K 20組) ,一葉秋堿 (1 mg· kg - 1) + *** (20 mg· kg - 1 ) 組 (SK組) 。用避暗實(shí)驗(yàn)測(cè)定給藥后 24 h 小鼠的避暗潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù) 。 結(jié)果 與 NS 組相比 ,K 10 、K 20組的避暗潛伏期縮短 ( P 均 < 0. 01) 、錯(cuò)誤次數(shù)增多 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) ,似呈劑量依賴性 。與 K 20組相比 ,SK組的避暗潛伏期延長(zhǎng) ( P < 0. 01) 、錯(cuò)誤次數(shù)減少 ( P < 0. 01) ,但不能恢復(fù)至 NS 組水平 ( P < 0. 01 , P < 0. 05) 。 結(jié)論 GABAA 受體部分介導(dǎo)了***對(duì)小鼠的記憶損害作用 。
關(guān)鍵詞 :*** ;小鼠 ;記憶 ;避暗實(shí)驗(yàn)
氯酮 (ketamine ,K) 是臨床常用的靜脈*** ,具有明顯的鎮(zhèn)痛作用 1 - 2 ,在術(shù)中及術(shù)后鎮(zhèn)痛中應(yīng)用比較廣泛 。近年研究發(fā)現(xiàn) ,***對(duì)認(rèn)知功能亦
有影響 3 ,但是其作用機(jī)制尚不清楚 。本研究利用避暗實(shí)驗(yàn) ,并通過預(yù)先皮下注射 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿 ( securinine ,S) 4 ,觀察不同劑量***對(duì)小鼠記憶的影響 ,探討***是否通過GABAA 受體而影響記憶 。
1 材料和方法
1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 KM 小鼠 (清潔級(jí) ,徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ,合格證號(hào) SYXK(蘇) 2002 - 0038) ,體重 22～25 g ,自由攝食飲水 。實(shí)驗(yàn)前 3 天使小鼠熟悉實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 ,每日 9 :00～15 :00 在隔音的環(huán)境中進(jìn)行避暗實(shí)驗(yàn) 。
1. 2 ** 鹽酸氯酮注射液購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司 (批號(hào) 03021032) ,硝酸一葉秋堿注射液購自江蘇前進(jìn)制藥廠 (批號(hào) 041210) ,均以生理鹽水 (NS) 稀釋至所需濃度 。
1. 3 實(shí)驗(yàn)儀器
上海欣軟科技公司可提供避暗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) .
1. 4 動(dòng)物分組及處理 按分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)將小鼠分組 ,使各組小鼠雌雄比例 、平均體重基本相同 。將小鼠分為 6 組 :NS 組 、一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 組 (S組) 、不同劑量的*** (5 mg· kg - 1 、10 mg· kg - 1 、20 mg· kg - 1 ) 組 ( K 5 、K 10 、K 20 組) 和一葉秋堿 (1 mg·kg - 1 ) + *** (20 mg· kg - 1) 組 (SK組) ,每組均為 10只 。在訓(xùn)練前 10 min ,S 組 、SK 組皮下注射一葉秋堿 。訓(xùn)練前 5 min ,各組分別皮下注射生理鹽水或*** 。所有的**和 NS 均按照 10 ml· kg - 1 的劑量給予 。
1. 5 避暗實(shí)驗(yàn) 避暗實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)。實(shí)驗(yàn)裝置分為明暗兩室 ,兩室之間有一直徑為 3 cm 大小的圓洞 ,暗室底部銅柵接電 。訓(xùn)練時(shí)先將小鼠放入反應(yīng)箱中適應(yīng) 3 min ,然后暗室底部銅柵通 40 V、50 Hz 交流電 。將小鼠背對(duì)洞口放入明室 ,小鼠進(jìn)入暗室則受到電擊 。訓(xùn)練時(shí)避暗潛伏期大于 180 s 者棄去不用 。 24 h 后再次將小鼠放入明室 ,記錄 5 min 內(nèi)**次進(jìn)入暗室的時(shí)間 (潛伏期) 和進(jìn)入次數(shù) (錯(cuò)誤次數(shù)) 。如果 5 min 時(shí)小鼠仍未進(jìn)入暗室 ,錯(cuò)誤次數(shù)記為 0 次 ,潛伏期記為 300 s。
1. 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有的數(shù)據(jù)均以 € x ±s 表示 ,用SPSS 11. 5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 ,方差分析進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn) ,兩兩比較用 LSD 檢驗(yàn) , P < 0. 05 為有顯著性差異 。
2 結(jié) 果
小鼠避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 1。
與 NS 組比較 : 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01 ;與 K 20 組比較 :△△P < 0. 01
與 NS 組相比 : K 5 組錯(cuò)誤次數(shù)略增多 、潛伏期略縮短 ,差異無顯著性 ( P > 0. 05) ; K 10 、K 20 組的錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) ,避暗潛伏期縮短( P 均 < 0. 01) ,似呈劑量依賴性 。與 K 20 組相比 :SK組的錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少 ( P < 0. 01) 、避暗潛伏期明顯延長(zhǎng) ( P < 0. 01) ,有顯著性差異 ,但不能恢復(fù)至 NS組水平 ( P < 0. 05 , P < 0. 01) 。
3 討 論
全身麻醉期間可能發(fā)生術(shù)中知曉 ,曾有報(bào)道 ,56. 3 %的創(chuàng)傷后情緒紊亂癥患者曾經(jīng)有過術(shù)中知曉的經(jīng)歷[6 ] ,若手術(shù)中不當(dāng)?shù)恼勗捇蛱弁创碳さ却媪粲谟洃浿?nbsp;,則可能對(duì)其以后的精神行為或術(shù)后疼痛帶來負(fù)面影響[7 ] ,因此研究全身麻醉中的記憶是非常有意義的 。γ- 氨基丁酸 ( GABA) 是**神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì) ,對(duì)學(xué)習(xí)與記憶具有重要作用[8 ] 。因此我們利用 GABAA 受體的特異阻斷藥一葉秋堿作為工具藥 ,來探討***對(duì)記憶的影響及其與 GABAA 受體的關(guān)系 。
人和動(dòng)物的心理活動(dòng)是無法直接觀察到的 ,只能根據(jù)觀察到的刺激反應(yīng)來推測(cè)腦內(nèi)發(fā)生的過程 ,對(duì)腦內(nèi)記憶過程的研究只能從人類或動(dòng)物學(xué)習(xí)或執(zhí)行某種任務(wù)后間隔一段時(shí)間 ,測(cè)定他們的操作成績(jī)或反應(yīng)時(shí)間來評(píng)價(jià)記憶效果 。避暗實(shí)驗(yàn)是利用鼠類的嗜暗習(xí)性而設(shè)計(jì)的 ,是目前常用的測(cè)定鼠類記憶成績(jī)的方法之一 ,操作簡(jiǎn)單易行 ,動(dòng)物間的差異較小[5 ] ,因此我們本研究選擇了避暗實(shí)驗(yàn) 。
在本實(shí)驗(yàn)中 ,單獨(dú)給予 GABAA 受體的特異性阻斷藥一葉秋堿 (1mg· kg - 1 ) 后 ,與生理鹽水組相比 ,小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)和避暗潛伏期均無顯著差異 ,說明單獨(dú)應(yīng)用此劑量的一葉秋堿對(duì)小鼠的記憶并無明顯影響 。單獨(dú)給予較大劑量的*** (10 mg· kg - 1 ,20 mg· kg - 1 ) ,小鼠的避暗潛伏期明顯縮短 、錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加 ,并且似呈劑量依賴關(guān)系 ,說明***對(duì)小鼠的記憶有損害作用 。而在給予*** (20 mg· kg - 1 ) 之前 ,預(yù)先用一葉秋堿 (1 mg· kg - 1 ) 進(jìn)行處理 ,小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)則較單獨(dú)應(yīng)用*** (20 mg· kg - 1 ) 明顯減少 、避暗潛伏期明顯延長(zhǎng) ,但是未能恢復(fù)至生理鹽水組水平 ,說明一葉秋堿可以部分逆轉(zhuǎn)***對(duì)記憶的損害作用 ,提示 GABAA 受體介導(dǎo)了***損害記憶的作用 。至于***對(duì)記憶的損害作用有無其他機(jī)制 ,尚待進(jìn)一步研究 。
